آزمون دیسک دیفیوژن

مقدمه

آزمون دیسک دیفیوژن یکی از مهم ترین و موثرترین تست های آزمایشگاهی است که به منظور بررسی و سنجش اثرات ضد باکتریائی یک ترکیب مورد استفاده قرار می گیرد. این تست به وفور در آزمایشگاه استفاده می شود، لذا در اینجا به منظور آشنایی بیشتر لازم است ادامه مطلب را بررسی کنید تا بتوانید اطلاعات بیشتری در این حوزه کسب کنید.

 

مهم ترین نکات موثر در استفاده از آزمون دیسک دیفیوژن

یکی از موارد قابل توجه در آزمون دیسک دیفیوژن، تحمل آنتی بیوتیک می باشد که توانایی بقای طولانی مدت یک باکتری را فراهم می کند. این امر یک پدیده بالقوه بالینی مهم است که معمولاً در آزمایشگاه میکروبیولوژی بالینی نادیده گرفته می شود.

اخیراً در شرایط آزمایشگاهی، آزمایش‌ها نشان می‌دهند که تحمل بالا می‌تواند تحت درمان‌های متناوب آنتی‌بیوتیکی قرار گیرد که نشان می‌دهد تحمل این امر ممکن است در بیماران نیز ایجاد شود.

با این حال، آزمایش‌های حساسیت آنتی‌بیوتیکی، مانند سنجش انتشار دیسک دیفیوژن، تنها غلظتی را که در آن یک سویه باکتریایی رشد نمی‌کند، یعنی سطح مقاومت را ارزیابی می‌کند.

سویه های تحمل بالا با استفاده از آزمون دیسک دیفیوژن تشخیص داده نمی شوند. در اینجا یک اصلاح ساده از روش استاندارد انتشار دیسک را ارائه می کنند که امکان ارزیابی نیمه کمی سطوح تحمل را فراهم می کند.

این روش جدید، “TDtest”، شناسایی باکتری‌های مقاوم و پایدار را با ترویج رشد باکتری‌های باقی‌مانده در ناحیه بازدارنده، پس از انتشار آنتی‌بیوتیک، امکان‌پذیر کرده است. با استفاده از TDtest،E. coli .

آزمون TD همچنین آنتی بیوتیک هایی را شناسایی کرد که به طور موثر باکتری های متحمل را از بین می برد. اطلاعات اضافی در مورد حساسیت دارویی که توسط آزمون TD ارائه شده است، باید امکان تنظیم آزمایشات موثرتر و بهتر را برای باکتری های بیماری زا فراهم کند.

در آزمون دیسک دیفیوژن، باکتری های مقاوم و پایدار می توانند از درمان های آنتی بیوتیکی بدون داشتن فنوتیپ مقاوم1 ، 2 ، 3 ، 4 ، 5 استفاده کنند و زنده بمانند.

در مقابل، انجام این عمل و مقاومت باکتری موجب می شود که برای رشد در غلظت های مختلف مورد بررسی قرار گیرد. در بررسی آزمون دیسک دیفیوژن نتایج اخیر نشان داده است که قرار گرفتن متناوب با یک درمان آنتی بیوتیکی بتالاکتام در شرایط آزمایشگاهی منجر به تکامل سریع خواب گذرا و تحمل تا رسیدن به 100٪ از جمعیت شده است.

چند تماس روزانه به مدت 3 ساعت برای ایجاد این سطح و تحمل بالا نسبت به آنتی بیوتیک کافی بوده و منجر به شکست درمان شده است. جالب اینجاست که باکتری ها برای انطباق با مدت زمان تکامل یافته، قرار گرفتن در معرض آنتی بیوتیک گذرا به جای ماهیت شیمیایی دقیق آن و با خفته ماندن در طول درمان بدون مقاوم شدن، از کشتن آنتی بیوتیکی اجتناب کرده اند.

از آنجایی که تست قرار گرفتن در معرض آنتی بیوتیک در شرایط آزمایشگاهی مشابه یک درمان معمولی در بیماران است، لذا تشخیص تحمل در کلینیک ممکن است برای شناسایی مکانیسم های مربوط به بقا و برای ابداع آزمایشات درمانی موثر بسیار مهم باشد.

در آزمون دیسک دیفیوژن، کلنی های جدا شده از هر ارگانیسمی که ممکن است نقش بیماری زایی داشته باشد باید از صفحات آگار اولیه انتخاب شده و از نظر حساسیت آزمایش شوند.

مراحل شناسایی ممکن است به طور همزمان انجام شود. مخلوط انواع مختلف میکروارگانیسم ها را نباید روی یک صفحه آزمایش کرد. از انجام آزمایش های حساسیت به طور مستقیم با مواد بالینی باید اجتناب شود.

هنگامی که ماهیت عفونت مشخص نیست و نمونه حاوی رشد مخلوط یا فلور طبیعی است، که در آن موجودات احتمالاً ارتباط کمی با عفونت تحت درمان دارند، باید بررسی هایی صورت گیرد.

از میان بسیاری از محیط های کشت، NCCLS آگار مولر-هینتون را توصیه می‌کنند زیرا: منجر به تکرارپذیری خوب می‌شود. مهارکننده های سولفونامید، تری متوپریم و تتراسایکلین در این روش کم است. منجر به رشد رضایت بخش بیشتر پاتوژن های باکتریایی می شود و داده های زیادی در مورد تست های حساسیت انجام شده با این محیط جمع آوری شده است.

اگر دسته‌ای از محیط‌ها از رشد کافی ارگانیسم پشتیبانی نکنند، اندازه منطقه بزرگ‌تر خواهد شد و نتیجه نتایج نادرستی را ارائه می‌دهد. بنابراین، فقط باید از روش ها و محیط هایی که از استانداردهای NCCLS پیروی می کنند استفاده شود.

محیط آگار باید در دمای اتاق دارای pH 7.2 تا 7.4 باشد. سطح باید مرطوب اما بدون قطرات رطوبت باشد. طبق توصیه‌های سازنده، دیسک‌های آنتی‌بیوتیک باید در دمای 8 درجه سانتی‌گراد یا کمتر تا زمانی که نیاز باشد در دمای -14 درجه سانتی‌گراد یا پایین‌تر نگهداری شوند. قبل از استفاده، دیسک ها را به دمای اتاق گرم کنید. از دیسک های منقضی شده استفاده نکنید.

برای استاندارد کردن چگالی تلقیح، از استاندارد کدورت BaS04 استفاده می شود (استاندارد مک فارلند 0.5، تقریباً 10 ثانیه ارگانیسم در هر میلی لیتر) است.

 

نتیجه گیری

علاوه بر این، در بررسی آزمون دیسک دیفیوژن مطالعات نشان داده است که تحمل بالا که منجر به شکست درمان می شود، به سرعت می تواند برای کلاس های دیگر از آنتی بیوتیک بررسی شود و همچنین در طول درمان و جهش های مربوط به تداوم در سویه های بالینی مشخص شده است. بنابراین، تشخیص روتین تحمل در ایزوله‌های بالینی ممکن است نور جدیدی بر مسیرهایی که منجر به شکست درمان آنتی‌بیوتیکی می‌شوند، روشن کند.

روش فعلی در آزمایشگاه میکروبیولوژی بالینی برای تجزیه و تحلیل شکست درمان آنتی بیوتیکی برای شناسایی ایزوله ها با حداقل غلظت مهاری (MIC) بالاتر از نقطه شکست تنظیم شده است. در این روش باکتری های پایدار و متحمل نادیده گرفته خواهند شد، زیرا MIC آنها بدون تغییر است.