درباره آنالیز

الکتروفورز یکی از تکنیکهاي آنالیتیکی قدرتمند در جداسازي و آنالیز دامنه وسیعی از آنالیت هاي یونیزه محسوب می گردد .آنالیته ایی  که بطور ویژه مورد توجه قرار میگیرند عبارتند از : پروتئین ها، پپتیدها، آمینواسیدها، اسیدهاي نوکلئیک و اولیگونوکلئوتیدها, نوکلئوزی ها, اسیدهاي آلی و آنیون ها و کاتیون هاي کوچک موجود در مایعات و بافت هاي بدن .اصطلاح الکتروفورز اشاره به حرکت همه ترکیبات یا ذرات باردار در یک محلول(محیط مایع )تحت تاثیر جریان الکتریکی دارد.

آنالیز SDS-PAGE یک روش کم هزینه سریع و تکرار پذیر جهت مطالعه پروتئین ها می باشد. این روش به طور معمول برای بررسی مراحل خالص سازی، محاسبه مقدار نسبی و تعیین وزن مولکولی پروتئین ها بکار می رود. در تکنیک SDS-PAGE به دلیل استفاده از ماده سدیم دودسیل سولفات (SDS)  و همچنین ویژگی های خاص ژل پلی اکریل آمید قدرت تفکیک پروتئین ها بسیار مطلوب می باشد. در این تست مولکول های SDS  با اتصال به پروتئین ها بار طبیعی آنها را می پوشاند و توزیع یکنواختی از بارهای منفی بر روی آن ایجاد می نماید. در نتیجه این اتفاق، جداسازی پروتئین ها تنها بر اساس وزن مولکولی­شان صورت می گیرد. جهت خطی نمودن مولکول های پروتئینی، آنها را در معرض مقدار کافی SDS ، و ماده احیا کننده مرکاپتو اتانول جهت از بین بردن باندهای دی سولفیدی و احیانا دقایقی حرارت قرار می گیرند.

زمانی که ژن را بررسی می کنند ، آن را در دو سطح ژنومی و پروتئوم ای انجام می دهند . برای بررسی پروتئین های سلول از  تکنیک sdspage   استفاده می کنند .

‏sds page age به معنای سدیم دودسیل سولفات الکتروفورز با ژل آکریل آمید و پلی آکریل آمید است . در این تکنیک پروتئین ها الکتروفورز را شده را  بر اساس اندازه در ژل مرتب می کنند . در این تکنیک از سدیم دودسیل سولفات برای مرتب کردن پروتئین ها بر اساس وزن مولکولی و برای خنثی کردن و یا یکسان کردن بار پروتئین ها استفاده می شود . اگر در این تکنیک از سدیم دودسیل سولفات استفاده نشود ، علاوه بر اینکه پروتئین ها بر اساس وزن مرتب سازی نخواهند شد ، بار پروتئین ها هم تخلیه نخواهد شد .

آنالیز sds page پروتئین ها را از بار منفی پر میکند و همه پروتئین ها را هموار می نماید . در طی این تکنیک فقط وجود یا نبود پروتئین مورد بررسی قرار می گیرد و همچنین وزن پروتئین مشخص میشود . ممکن است در ژل دو پروتئین متفاوت وجود داشته باشد ، که دارای وزن یکسانی  باشند و در sds page در یک نقطه قرار بگیرند . اگر پروتئینی برای سنجش ، حساسیت بالایی داشته باشند از تکنیک الکتروفورز دو بعدی استفاده می کنند . در اس دی اس پیج پروتئین با وزن کمتر از منافذ ژل به راحتی عبور کرده و تعداد حرکات بیشتری در ژل خواهد داشت .

زمانی که تکنیک ‏sds پیج را بر روی پروتئین انجام میدهیم ، وزن مولکولی پروتئین ها ، آنها را از یکدیگر مجزا خواهد کرد . زمانی که این مولکول ها را در یک میدان الکتریکی قرار می دهید ، رشته های پلی پپتیدی که دارای بار منفی هستند بر اساس مقدار باری که دارند به سمت آنها حرکت می کنند . میزان حرکت رشته های پلی پپتیدی با وزن مولکولی  نسبت عکس با یکدیگر دارند.

در دناتوره کردن پروتئین ها از سدیم دودسیل سولفات یا همان آن از اس دی اس استفاده می شود .

آنالیز sds page

الکتروفورز

الکترو فورز به معنی جداسازی و آنالیز کردن دامنه ی  گسترده‌ای از آنالیت یونیزه شده می باشد . در اینجا منظور از آنالیت ها که به طور ویژه تحت تاثیر الکتروفورز قرار می گیرند شامل پروتئین ها ، پپتیدها ،آمینو اسیدها و اسیدهای نوکلئیک ،الیگو نوکلئوتید ها ، نوکلئوزیدی ها ، اسیدهای آلی، آنیون ها و کاتیون های کوچک در مایعات بدن است ، که ممکن است در بافت های بدن هم وجود داشته باشد . در کل می‌توان گفت الکتروفورز به حرکت و جهت تمام ترکیبات یا ذرات  باردار در یک محلول که در محیطی مایع است گفته می شود ، که تحت تاثیر جریان الکتریکی قرار می گیرد و یک  میدان الکتریکی در آن جا حاکم است .

آنالیز sds page یا دودسیل سدیم سولفات روشی مقرون به صرفه است  و برای انجام آن نیاز نیست که مبلغ زیادی را پرداخت نمایید و در مدت زمان کم  انجام می شود ،  زمان بر نبوده و به صورت چند بار تکرار پذیر است ،  که می توان از این طریق پروتئین‌ها را مورد مطالعه و بررسی دقیق قرارداد .

تکنیک اس دی اس پیج برای بررسی انواع مراحل انجام شده در خالص سازی  ،محاسبه کردن مقدار نسبی و برای تعیین کردن وزن مولکولی پروتئین ها به کار می رود . در اس دی اس پیج که ماده سدیم دودسیل سولفات یا همان اس دی اس مورد استفاده قرار می گیرد  و همچنین این وجود ژل پلی آکریل آمید با یکدیگر می توانند برای قدرت تفکیک و جداسازی پروتئین ها بسیار موثر باشند . در تکنیک اس دی اس پیج مولکولهای سدیم سولفات ت دودسیل به پروتئین ها متصل می شوند و بار طبیعی پروتئینها را خنثی می کنند و الکترون و بار منفی یکسان و یکنواختی را بر روی پروتئین ها ایجاد می کنند .

پس از انجام این روند تفکیک پروتئین ها را فقط می‌توان بر اساس وزن مولکولی که دارند انجام داد . اگر در این تکنیک میخواهید مولکولهای پروتئینی را در جهت خطی نمودن قرار دهید   پروتئین ها را در تماس با مقدار زیادی از دودسیل سدیم سولفات بگذارید .  همچنین پروتئین ها را در تماس با ماده احیا کننده های به نام مرکاپتو اتانول که برای  از بین بردن  باندهای دی سولفیدی مورد استفاده قرار می گیرد که بابد  به آن مقدار ی  حرارت و گرما دهید .

مشخصات دستگاه

نام دستگاه: SDS-PAGE

کمپانی سازنده: Bio Rad

مدل دستگاه: –

کشور سازنده: آمریکا

نمونه آنالیز
هزینه آنالیز

هر بار ران سیستم دارای 8 چاهک 1 میلیون و دویست هزار تومان